RNA干扰SALL4基因对儿童睾丸卵黄囊瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的：研究干扰SALL4基因对儿童睾丸卵黄囊瘤细胞的体外增殖、凋亡的影响。方法：通过构建SALL4干扰质粒载体pGPU6/GFP/Neo-SALL4 shRNA,转染儿童睾丸卵黄囊瘤细胞,并在mRNA和蛋白水平验证干扰效果,通过CCK-8、流式细胞术来研究其对儿童睾丸卵黄囊瘤细胞体外增殖、凋亡的影响。结果：成功构建载体并干扰SALL4表达后,荧光定量PCR结果示干扰组mRNA水平（24.0%±4.0%）较阴性对照组（93.0%± 43.0%）显著下降（P＜0.05）,蛋白相对表达量（0.39±0.10）也较阴性对照组（1.02±0.09）显著降低（P＜0.05）,儿童睾丸卵黄囊瘤细胞的体外增殖活力显著降低,细胞凋亡率显著上升（P＜0.05）。结论：RNA靶向干扰SALL4表达可抑制儿童睾丸卵黄囊瘤细胞增殖能力并诱导其凋亡,提示SALL4基因可能是儿童睾丸卵黄囊瘤一个潜在的治疗靶点。     

STC1-siRNA对甲状腺乳头状癌细胞增殖和凋亡的影响及机制

目的探讨抑制甲状腺乳头状癌中斯钙素1(STC1)的表达对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。方法将NC-siRNA和STC1-siRNA转染至甲状腺乳头状癌K1细胞,分别作为阴性对照组和STC1-siRNA组,以未转染的细胞作为空白对照组。蛋白质印迹法(Western blot)检测各组细胞中STC1、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(BAX)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化的AKT(p-AKT)的相对表达量,CCK8检测细胞的增殖活力,流式细胞仪检测细胞的凋亡率及活性氧簇(ROS)水平。结果阴性对照组和空白对照组中STC1蛋白的相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05);STC1-siRNA组中STC1蛋白的相对表达量明显低于空白对照组(P<0.01)。转染24、48、72 h后,STC1-siRNA组细胞的光密度(OD)均明显低于空白对照组(P<0.01);转染48 h后,STC1-siRNA组细胞的凋亡率明显高于空白对照组(P<0.01)。STC1-siRNA组中ROS水平及BAX蛋白的相对表达量均明显高于空白对照组,Bcl-2、p-AKT蛋白的相对表达量均明显低于空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论抑制甲状腺乳头状癌中STC1基因的表达可降低肿瘤细胞的增殖活力,诱导肿瘤细胞凋亡,其作用机制可能与下调AKT信号通路有关。     

HOXA13 在非小细胞肺癌组织中的表达及其对A549 细胞和移植瘤生长的影响

[摘要] 目的：探讨HOXA13 在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）组织中的表达及沉默HOXA13 基因表达对A549 细胞和移植瘤生长的影响。方法：收集2014 年3 月至2016 年4 月在焦作煤业集团有限责任公司中央医院胸外科接受手术切除治疗的112 例NSCLC癌组织和相对应的癌旁组织。qPCR实验检测NSCLC癌和癌旁组织中HOXA13 表达。培养A549 细胞并分为siRNA-HOXA13 组、阴性对照组和对照组,qPCR实验检测A549 细胞中HOXA13 表达,CCK-8 法检测细胞增殖能力,Transwell法检测细胞侵袭能力。建立裸鼠移植瘤模型,观察裸鼠生长情况,5 周后处死,称瘤体质量并计算抑瘤率;qPCR实验检测瘤体组织中HOXA13 表达水平。结果：NSCLC 癌组织中HOXA13 mRNA相对表达量明显高于癌旁组织（1.83±0.13 vs 1.12±0.10,t=47.008,P=0.000）,其相对表达量与TNM 分期、分化程度和淋巴结转移相关（P<0.05）。siRNA-HOXA13 组细胞中HOXA13 mRNA相对表达量低于阴性对照组和对照组（均P<0.05）;siRNA-HOXA13 组24、48、72、96 h 时细胞增殖水平（D值）明显低于阴性对照组和对照组（F=30.727、5.427、13.816 和24.454,均P<0.05 或P<0.01）;siRNA-HOXA13 组侵袭细胞数低于阴性对照组和对照组（均P<0.05）;siRNA-HOXA13 组裸鼠移植瘤5 周时瘤体质量小于阴性对照组和对照组,而抑瘤率高于阴性对照组（均P<0.05）;siRNA-HOXA13 组裸鼠移植瘤组织中HOXA13 mRNA相对表达量低于阴性对照组和对照组（均P<0.01）。结论：NSCLC癌组织中HOXA13 呈高表达,且与肿瘤发生、进展及转移有关;特异性沉默HOXA13 基因表达可抑制细胞增殖和侵袭力,并抑制裸鼠移植瘤生长。     

RNA干扰在破骨细胞分子调控应用的研究进展

骨质疏松症及其相关骨疾病由成骨细胞和破骨细胞比例失调造成的,导致骨折,致使平均寿命预期降低,迫切需要新的治疗方法。RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种序列特异性转录后基因沉默技术,可用于调控蛋白质的表达,目前被用作阐明疾病相关基因的工具。破骨细胞是一类由骨髓造血干细胞来源的多核巨细胞,其主要作用是介导骨组织的吸收。目前对破骨细胞生物学特性、分化调控机制以及相关通路的研究比较多,但是关于RNAi在破骨细胞分子调控方面的研究尚缺乏。本文就RNAi在破骨细胞分子调控应用方面的研究作相关综述分析,介绍RNAi技术敲除过度骨吸收的多种分子靶标,为科研使用RNAi对破骨细胞的研究提供参考,以期更好地发展靶向的治疗策略。     

DARPP-32基因对SH-SY5Y细胞药物敏感性的调节作用

目的：探讨DARPP-32基因对人神经母细胞瘤细胞药物敏感性的调节作用。方法：构建DARPP-32基因的真核表达载体和小干扰RNA载体，并将它们转导入人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y，G418筛选后获得稳定转染的阳性克隆后，应用RT-PCR和Western blotting进行鉴定；MTT法检测细胞转染前后药物敏感性的变化；流式细胞仪检测细胞转染前后对阿霉素的蓄积浓度的变化；RT-PCR和Western blotting检测细胞转染前后耐药相关蛋白P-gp、MRP和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达变化。结果：成功构建了DARPP-32基因的真核表达载体和小干扰RNA载体；筛选到稳定的DARPP-32高/低表达的神经母细胞瘤细胞模型；MTT试验和流式细胞仪检测结果显示，上调DARPP-32的表达能够显著增强神经母细胞瘤细胞对长春新碱、阿霉素、5-氟尿嘧啶和顺铂的敏感性，提高细胞内阿霉素的蓄积（P<0.05），转染DARPP-32小干扰RNA后的细胞对化疗药物的敏感性降低，细胞内的阿霉素蓄积量显著减少（P<0.05）；RT-PCR和Western blotting结果显示，DARPP-32能够下调 P-gp 和Bcl-2的表达。结论：DARPP-32基因能够调节神经母细胞瘤细胞对化疗药物的敏感性，具有较好的临床应用前景。     

Incidence,severity, longitudinal trends and predictors of acute and chronic oxaliplatin‐induced peripheral neuropathy in Taiwanese patients with colorectal cancer

The purpose of this study was to evaluate the longitudinal incidence, severity, pattern of changes or predictors of oxaliplatin‐induced peripheral neuropathy (OXAIPN) in Taiwanese patients with colorectal cancer. A longitudinal repeated measures study design was employed, and 77 participants were recruited from the colorectal and oncology departments of two teaching medical centres in Taiwan. Physical examinations were performed, and self‐reports regarding adverse impacts of OXAIPN and quality of life were obtained at five time points throughout 12 cycles of chemotherapy (C/T). The incidence of OXAIPN increased with C/T cycles (31.1%–81.9%), and the upper limb numbness and cold sensitivity were most significant acute OXAIPN symptoms (29.9%–73.6%). Findings also documented significant increases in overall severity, symptom distress, interference and physical results associated with OXAIPN over the course of C/T. Predictors of OXAIPN severity varied by treatment cycle, including younger patient, higher cumulative dose of oxaliplatin, greater body surface area, receipt of chemotherapy in winter and the occurrence of OXAIPN during prior C/T cycles. The results from this study might help healthcare providers to recognise the symptom characteristics, degree of influences, trends and high‐risk group of OXAIPN, facilitating early evaluation and potential interventions to mitigate or prevent negative effects of OXAIPN on patients.     

注射用福沙匹坦二甲葡胺中细菌内毒素检查法的建立

目的研究注射用福沙匹坦二甲葡胺细菌内毒素检查方法的建立。方法根据《中国药典》2010年版二部附录规定,确定试验溶液浓度和内毒素限度。结果在将样品稀释至3 g·L-1时无干扰,并将细菌内毒素限度为0.6 EU·mg-1。结论采用鲎试剂检查法对注射用福沙匹坦二甲葡胺中的内毒素检查是可行的。     

New therapeutic targets for amyotrophic lateral sclerosis

Introduction: Amyotrophic lateral sclerosis (ALS) is one of the most devastating neurological disorders, affecting approximately half a million people worldwide. Currently there is no cure or prevention for ALS. Although ALS is a rare condition, it places a tremendous socioeconomic burden on patients, family members, caregivers and health systems.

Areas covered: The review examines the mechanisms that may contribute to motor neuron degeneration in ALS, among which oxidative damage, glutatamate excitoxicity, mitochondrial dysfunction, impaired axonal transport, apoptotic cell death, growth factor deficiency, glial cell pathology and abnormal RNA metabolism are potential targets for ALS treatment. The article provides an overview of clinical trials performed to date in attempts to treat ALS with regard to molecular mechanisms and pathways they act on. It also discusses new trials based on recently developed molecular biology techniques.

Expert opinion: Despite significant effectiveness of several potential therapeutics observed in preclinical trials, the results were not translatable to patients with ALS. The development of effective treatments of ALS strictly depends on understanding the primary cause of the disease. This goal will only be achieved when we identify the trigger point for motor neuron death in ALS.